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一切曲折情节都是围绕着一个名叫Umbrella的化学品公司展开的。这是个表面看起来安份守己,默默无闻的小公司。可它"守法"的面纱背后,却在进行着骇人听闻的肮脏阴谋:其实,这里是一个专门从事研究、实验、生产毁灭性生化武器的地下工厂!本来,一切是在秘密中进行的,可意料之中的意外终于发生了:在Raccoon镇外深山中Umbrella下属的一个秘密研究所中,发生了病毒泄露事故,所有研究人员都变成了丧尸,进而发生了许多怪异的攻击事件。
本作的前半部份发生于《生化危机2》之前,女主角吉尔00馆事件后,一直调查有关安布雷拉公司的地下业务。当时美国联邦00决定以核弹彻底毁灭浣熊市,吉尔于是展开她的逃亡之旅。在逃亡期间,她受到安布雷拉公司欧洲分部派来浣熊市的生物武器追击者(Nemesis)追杀,并且遇上了隶属于UmbrellaBiohazardCountermeasureService(UBCS)的男主角卡洛斯,以及UBCS成员MikhailVictor、NicholaiGinovaef。
吉尔及卡洛斯逃至市00时,吉尔不幸受到追击者攻击而感染了T-病毒,于是卡洛斯便到安布雷拉公司旗下的附属医院寻找解药。
本作的后半部份发生于《生化危机2》之后,吉尔已经康复过来,于是继续出发逃命。此时美国联邦00已经准备发射导弹实施“灭菌作战计划”,吉尔需要在15分钟内离开浣熊市。最后,在00处理场成功击倒追击者,并且与卡洛斯乘坐直升机离开。
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